днк генотипирование что это
Молекулярно-биологические методы диагностики ВПЧ-инфекции
Молекулярно-биологические методы предоставляют информацию о развитии ВПЧ-инфекции, но не позволяют судить о наличии заболевания, поскольку факт инфицирования ВПЧ не всегда сопряжен с заболеванием. Два основных метода диагностики ДНК ВПЧ — полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени и метод гибридного захвата (Digine-тест). Оба метода практически не отличаются по чувствительности и специфичности, однако, сертифицирован и одобрен FDA только Digene-тест.
Технология Digene-теста основана на гибридном захвате и заключается в уникальном способе связывания вирусной ДНК с РНК-зондом, захвате полученного гибрида моноклональными антителами и хемилюминисцентной детекции образуемых комплексов.
По сути это качественный тест, который применяется для профилактического скрининга для ранней диагностики патологии шейки матки. Тест идентифицует 13 генотипов высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и 5 генотипов низкого риска (6, 11, 42, 43, 44).
Тест одобрен Федеральной службой РФ по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (ФСНСЗСР). Digene-тест выявляет клинически значимый уровень инфицирования вирусом папилломы человека, который приводит к развитию неоплазии шейки матки. Положительный результат теста выдается в единицах Digine. Отрицательный тест практически исключает CIN II и CIN III.
Обнаружение ДНК ВПЧ в качественном формате
ДНК ВПЧ длительно сохраняется в образцах тканей, поэтому ее легко можно идентифицировать. Для определения достаточно минимального количества исследуемого образца. «Качественное» определение ДНК ВПЧ имеет спорную клиническую значимость, поскольку указывает только на факт наличия вируса, не позволяя сделать прогноз относительно течения инфекции. В большинстве случаев инфекция элиминируется самостоятельно.
Количественное определение вируса ВПЧ
Количественный анализ ДНК ВПЧ наиболее чувствителен на ранних этапах папилломавирусной инфекции, когда отсутствуют другие признаки инфицирования. Например, цитологические, клинические. Метод количественного определения используется в качестве скрининга, особенно в рамках национальных программ контроля рака шейки матки, а также для оценки эффективности терапии.
Количественные ПЦР-методы направлены на максимальную чувствительность выявления вирусной ДНК, однако, не всегда существуют прямые клинические корреляции.
Одним из критериев клинически значимой инфекции, которая с высокой степенью вероятности способна развиться в неоплазию, рассматривается вирусная нагрузка. Вирусная нагрузка 3 lg на 105 клеток является клинически малозначимой, поскольку сопровождается минимальным риском дисплазии и почти в 100% случаев заканчивается спонтанной регрессией. Вирусная нагрузка больше 5 lg на 105 клеток считается повышенной и сопряжена с высоким риском развития дисплазии. Снижение вирусной нагрузки на 1 lg за 6 месяцев говорит о транзиторной инфекции.
Прогностическая ценность вирусной нагрузки на сегодняшний день однозначно не определена.
Генотипирование вируса методом ПЦР позволяет определить тип вируса ВПЧ и его онкогенность. Этот метод подходит для выявления персистенции ВПЧ и позволяет отличить случаи реинфекции. О реинфицировании говорит изменение спектра генотипов, о персистентной инфекции — сохранение генотипа вируса через год после первого тестирования.
При инфицировании несколькими генотипами ВПЧ одновременно, прогноз течения заболевания менее благоприятный, а риск персистенции и риск развития РШМ по сравнению с инфицированием одним типом более высокий.
Выявление ВПЧ высокого риска свидетельствует о наличие папилломавирусной инфекции. ВПЧ высококанцерогенного риска имеют различный онкогенный потенциал. На долю самых опасных, 16 и 18, приходится около 70% всех случаев цервикального рака. Генотипирование на ВПЧ 16 и 18 позволяет выделить группу женщин, которые имеют повышенный риск развития цервикального рака.
Рекомендации ВОЗ по профилактике рака шейки матки
Папилломавирус генотипирование (16,18,31,33,35;39,45,51,52,56,58,59) (качественный метод)
Описание исследования
Папилломавирусная инфекция – это общее название ряда вирусных заболеваний, характерной особенностью которых является образование на поверхности кожи и слизистых оболочек наростов, похожих на бородавки. Инфекции этого ряда хронические, с периодическими рецидивами, очень заразные и широко распространенные. Вызываются заболевания вирусом папилломы человека (ВПЧ), имеющего более 100 известных медицине генотипов. Заражение вирусом происходит, как правило, при половом акте, однако известны случаи инфицирования детей от больных матерей во время родов, а также передачи инфекции при бытовых контактах.
Наиболее вероятно заражение папилломавирусной инфекцией:
Зависимость вероятности инфицирования от количества половых партнеров можно проиллюстрировать следующими данными наблюдений: среди женщин, имеющих одного партнера, количество инфицированных вирусом составляется 17-20%, пяти и более партнеров – порядка 70-80%.
Длительность инкубационного периода ВПЧ может варьироваться от 2 месяцев до 10 лет. Как правило, инфекция протекает бессимптомно. Даже проведение кольпоскопического, цитологического и гистологического обследования могут показывать норму. Скрытую форму инфицирования вирусом папилломы человека можно выявить только методом ПЦР.
Почти у трети пациентов инфекция самопроизвольно исчезает из организма в течение полугода-года (особенно это свойственно молодым людям).
Болезни, вызываемые вирусом папилломы, разнообразны и зависят от его типа. Следствием заражения ВПЧ на определенном этапе может быть поражение среднего слоя эпителия, характеризуемое образованием как бы чешуйчатой трансформации клеток шейки матки. Развитие третьей стадии данного состояния становится возможным только при постоянном пребывании возбудителя инфекции, относящегося к генотипу с высокой онкологической степенью риска. Есть сведения, что наличие таких генотипов в течение 5-10 лет в организме женщин от 30 лет, значительно увеличивает риск возникновения онкологических новообразований шейки матки. Поражение вирусом папилломы человека клеток трофобласта (наружного слоя клеток зародыша) может привести к самопроизвольному аборту.
Следствием инфицирования ВПЧ может быть не только образование раковой опухоли женских половых органов, но и развитие плоскоклеточного рака у представителей обоих полов. Также проведенные исследования доказали непосредственную причастность вируса к появлению:
Эти образования являются доброкачественными и появляются при острой инфекции. Заражение ВПЧ детей чревато развитием папилломатоза гортани.
Причиной инфицирования мужчин в 40-60% случаев являются половые контакты с инфицированной женщиной. При проведении исследования у них обнаруживаются те же генотипы ВПЧ, что и у партнерш. Папилломавирус у лиц мужского пола может проявляться характерными высыпаниями на коже и слизистых оболочках половых органов.
Данное тестирование предназначено для выявления специфических фрагментов ДНК 16, 18, 31, 33, 35; 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов вируса папилломы человека. Исследование проводится методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), суть которого заключается в значительном увеличении количества специфических для ВПЧ фрагментов ДНК вируса с наблюдением за процессом в режиме реального времени. Материал, отбираемый для исследования – эпителиальные клетки урогенитального тракта.
Выявление при исследовании генотипов вируса папилломы человека с высокой онкологической степенью риска еще не означает наличие рака, но является показанием для дополнительного проведения гистологического, цитологического исследований и наблюдения за развитием инфекции в динамике.
Важность проведения повторного генотипирования обусловлена следующими аргументами:
1. Присутствие в организме нескольких генотипов вируса папилломы человека является показателем вероятности более тяжелого протекания инфекции с более высоким риском сохранения вируса в активном состоянии;
2. Различные генотипы характеризуются различной степенью канцерогенной активности. Наиболее опасными являются 16 и 18 тип ВПЧ. При обнаружении специфических фрагментов ДНК ВПЧ после теста на широкий спектр типов, необходимо проведение исследование на выявление 16 и 18 генотипов. Подтверждение их наличия является показанием к проведению кольпоскопии. Если при повторном обследовании обнаружены другие генотипы высокого онкологического риска, рекомендуется проведение цитологических исследований, а затем, в случае получения положительного ответа – кольпоскопии.
3. Повторное генотипирование дает возможность определить, что именно имеет место: реинфицирование или персистентная (хроническая) инфекция (в первом случае спектр генотипов изменяется, во втором – генотип остается тот же). Это важно знать, поскольку хроническая форма представляет значительную опасность, в то время как недавнее инфицирование может самопроизвольно излечиться. К тому же повторное заражение одним и тем же генотипом после самопроизвольного излечения практически невозможно.
Получение корректного результата исследования возможно только в том случае, когда отбор пробы эпителиальных клеток урогенитального тракта проведен строго в соответствии с техническими требованиями. Определить это позволяет дополнительный показатель – КВМ (контроль взятия материала), позволяющий выяснить, какое количество специфических фрагментов ДНК вируса попало в пробу с эпителиальными клетками.
Подготовка к исследованию
Цервикальный канал, влагалище
Соскобы у женщин отбираются не ранее пятого дня от начала менструального цикла и не позже пятого дня до предполагаемой даты следующей менструации. Если наблюдаются явные признаки заболевания, отбор пробы проводится непосредственно в день обращения.
Требования по подготовке к тестированию:
Проба не отбирается:
Мочеиспускательный канал (уретра)
У лиц обоего пола проба отбирается не ранее чем через 14 дней после применения антибиотиков местного действия и 30 дней после перорального приема противобактериальных средств.
За неделю до манипуляции рекомендуется прекратить прием всех медицинских препаратов. Если отказ от лечения невозможен, то пациенту необходимо поставить об этом в известность специалиста, направляющего его на обследование.
При отборе эпителиальных клеток из мочеиспускательного канала, манипуляция проводится перед мочеиспусканием, или через 2-3 часа после него (при обильных выделениях из уретры у мужчин – через 1 час).
Показания к исследованию
Интерпретация исследования
Данный тест – качественный. Результат выдается в одной из формулировок: «обнаружено» или «не обнаружено».
Референсное значение – «не обнаружено».
Положительный ответ свидетельствует о наличии в пробе биоматериала специфических фрагментов ДНК вируса папилломы человека 6, 18, 31, 33, 35; 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов, что является показателем высокого риска развития рака шейки матки и других новообразований.
Отрицательный ответ выдается:
Отсутствие в исследуемом материале специфических фрагментов ДНК ВПЧ 6, 18, 31, 33, 35; 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов не исключает возможность инфицирования другими генотипами вируса папилломы человека.
При положительном результате тестирования проводятся дополнительные исследования, что может задержать выдачу окончательного ответа.
Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:
Ф.И.О.: Иванов Иван Иванович Пол: м Год рождения: 01.01.0000
Дата исследования: 12.12.0000
Исследование
Результат
Нормы интерпретации
Примечание
[67] [кач.] Папилломавирус генотипирование (6, 18, 31, 33, 35; 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59)
При интерпретации результата анализа необходимо учитывать также показатели гистологического и цитологического исследований.
Литература:
3. Bekkers R., Meijer C., et al. Effects of HPV detection in population-based screening programmers for cervical cancer: a Dutch moment // Gynecol. Oncol. 2006; Mar: 100(3):451-4.
4. Khan M., et al. The elevated 10-year risk of cervical precancer and cancer in women with human papillomavirus (HPV) type 16 or 18 and the possible utility of type specific HPV testing in clinical practice // J. nat. cancer inst. 2005; 97:1072-9.
5. Snijders J., Meijer C. The value of viral load in HPV detection in screening // HPV today 2006; 8:8-9.
ВПЧ генотипирование: что это
Генотипирование ВПЧ проводится в случае выявления у человека признаков папилломавирусной инфекции.
Это важная диагностическая процедура, позволяющая определить, насколько опасным является вирус, поселившийся в вашем организме.
Зачем нужно ВПЧ-генотипирование?
ВПЧ является гетерогенным вирусом.
Это означает, что существует множество его форм.
Фактически, это целое семейство вирусов, различных по уровню патогенности.
При заражении разными типами ВПЧ в разной степени увеличивается риск рака, возникают разные симптомы.
Около 40 типов ВПЧ передаются половым путем.
Четырнадцать из них являются вирусами высокого онкогенного риска.
Таким образом, генотипирование используется для того, чтобы узнать: какой тип вируса персистирует у пациента.
Это важно для оценки онкогенного риска.
Ведут пациентов с разными типами ВПЧ совершенно по-разному.
Если с низкоонкогенными вирусами человеку можно удалить бородавки и отправить домой, то обнаружение высокоонкогенных типов требует динамического наблюдения.
Возрастает роль медикаментозной терапии.
Человеку важно избавиться от носительства вируса как можно скорее, чтобы предотвратить предраковые процессы и онкологические заболевания.
У всех ли ВПЧ вызывают рак?
Конечно же, далеко не у каждого человека вирусы вызывают рак.
Даже те, которые имеют высокий онкогенный риск.
В 90% случаев человек заражается, и самостоятельно излечивается в течение 1-2 лет.
Часто у него вообще нет никаких симптомов.
В иных случаях появляются кондиломы или изменения эпителия.
Но патологические очаги исчезают после элиминации вируса.
Тем не менее, в 10% случаев формируется хроническая персистирующая инфекция.
Именно она представляет наибольшую угрозу.
Чаще всего ВПЧ вызывает цервикальный рак у женщин.
Другие виды злокачественных опухолей, в том числе среди мужчин, являются большой редкостью.
К ним относятся новообразования:
Наблюдение требуется в первую очередь за женщинами.
У них вирус вызывает цервикальный рак, а это самая распространенная причина смерти от онкологических причин среди пациенток репродуктивного возраста.
Чаще в этот период встречается только рак груди.
Но от него умирают реже.
Коварство заболевания состоит в том, что выявляется оно поздно, а эффективность лечения низкая уже со 2 стадии.
Тем не менее, цервикальный рак распространен только в странах с низким уровнем медицины.
Это полностью контролируемое заболевание.
Рак не развивается на ровном месте.
Существует множество способов предотвратить его.
Для этого можно вовремя выявить ВПЧ, провести генотипирование, установить наблюдение в случае обнаружения вируса высокого онкогенного риска.
Уже на этом этапе медикаментозное лечение часто позволяет избавиться от инфекции и предотвратить предраковые процессы.
Если же выявлены предраковые заболевания, то они могут быть излечены.
И на всё это у женщины есть даже не годы – десятки лет.
Но если она никогда не ходит к гинекологу и не сдает анализы, то цервикальный рак появляется и развивается.
Хотя происходит это медленно, выявить болезнь вовремя шансов нет.
Потому что симптомы отсутствуют вплоть до того момента, когда патология становится неизлечимой.
ВПЧ генотипирование: что дает этот анализ
Это процесс определения типа вируса.
Он основан на определение участка ДНК, то есть, генотипа возбудителя.
Цели исследования:
В итоге проведения теста врач получает такую информацию:
ВПЧ ВКР генотипирование
ВКР расшифровывается как высокий канцерогенный риск.
Таким образом, это исследование отличается тем, что определяются только высокоонкогенные вирусы.
К примеру, вы не получите заключение: обнаружен 6, 11 или другой тип с низкой онкогенностью.
На них тестирование может не проводиться.
Ситуации, когда требуется типирование именно на вирусы ВКР:
То есть, анализ делают, когда риск онкопатологии у конкретного пациента оценивается как высокий.
При этом может быть неважным, присутствуют ли другие вирусы из числа тех, которые почти никогда не вызывают рак.
ВПЧ генотипирование: количественный анализ
Врачу мало знать только тип вируса.
Необходима также информация о его количестве.
Единицей измерения служит количество ДНК в 100 тысячах эпителиальных клеток.
Их должно быть меньше 10 в 5 степени.
Если этот порог достигнут или превышен, такая концентрация вируса считается клинически значимой.
Онкогенные вирусы в таком количестве провоцируют интраэпителиальную неоплазию.
А затем на её фоне развивается рак.
Зачем врачу знать количество вируса:
Анализ проводят на 10-14 высокоонкогенных типов.
Для определения количественных показателей проводится ПЦР в реальном времени.
Она дает возможность дифференцировать клинически значимую концентрацию вируса от разрешающихся или транзиторных форм инфекции.
Кому рекомендовано генотипирование ВПЧ?
В нашей стране типирование назначается не с профилактической целью, как на Западе, а по медицинским показаниям.
Многие женщины не проходят скрининг.
Поэтому частота цервикального рака и смертность от него в стране остается высокой.
Обычно женщины приходят к врачу, если у них появились бородавки на гениталиях, либо были получены патологические результаты цитологического исследования цервикального мазка.
Но большинство международных организаций рекомендуют делать анализ на ВПЧ даже без каких-либо симптомов или предварительных исследований.
То есть, проводить его всем подряд поголовно.
Согласно рекомендациям FIGO исследование на ВПЧ проводят 1 раз в 5 лет до возраста 65 лет.
ВОЗ рекомендует делать анализ минимум 1 раз всем женщинам, пребывающим в возрасте 30-49 лет.
Необходимость обследования на ВПЧ предусмотрена и российским приказом Минздрава 572н от 1 ноября 2012.
Непосредственно генотипирование (определение точного типа ВПЧ) не является обязательным.
Но по возможности рекомендуется проводить типирование хотя бы на 16 и 18 типы как на самые опасные среди всех существующих.
Допускается также применение альтернативных исследований.
Широко используется Digene-тест.
Он основан на гибридизации участков ДНК с РНК зондами.
В дальнейшем они улавливаются антителами с флуоресцентной меткой.
При позитивном результаты выдаются количественные показатели.
Существуют также тесты, основывающиеся на обнаружении РНК ВПЧ.
В частности, тест Aptima способен обнаружить 14 высокоонкогенных типов с частичным генотипированием.
Что делать, если выявлены опасные типы ВПЧ?
Риск обнаружения опасных типов ВПЧ у отдельно взятого человека невысокий.
У большинства людей никакие разновидности этого вируса не выявляются вообще.
Если же пациент инфицирован, то с высокой вероятностью это неопасный тип ВПЧ.
Низкоонкогенные разновидности встречаются гораздо чаще.
Если же вам не повезло, и у вас обнаружили высокоонкогенный ВПЧ, нужно смотреть на его количество.
В случае, когда оно небольшое, лечение не требуется.
Скорее всего, ваш организм уже начал избавляться от вируса, и вскоре он перестанет определяться.
Хуже, если концентрация его высокая.
В таком случае необходимо следующее:
Чаще всего это исследование проводят не после генотипирования ВПЧ, а одновременно с этим тестом.
По результатам этих двух анализов может быть принято решение о необходимости кольпоскопии.
Она нужна для выявления участков измененного эпителия (предраковых процессов).
В свою очередь результаты кольпоскопии (осмотра цервикса) могут потребовать проведения биопсии.
Это процедура, при которой берут фрагмент ткани и отправляют на гистологическое исследование.
По его результатам может быть диагностирована как злокачественная опухоль, так и предраковый процесс 1-3 стадии.
1 стадия обратима, тогда как на 2-3 требуется «прижигание», чтобы предотвратить рак.
Но развиваются предраковые процессы очень медленно.
Если вовремя провести противовирусное лечение, то вирус исчезает из организма, и эпителий шейки матки восстанавливается.
Пациентов обязательно наблюдают.
Они сдают анализы раз в полгода, чтобы оценить, увеличивается или уменьшается концентрация вируса.
Для его элиминации используют противовирусные и иммуномодулирующие препараты.
Можно ли делать ВПЧ без генотипирования?
Конечно же, делать такой анализ можно.
Он тоже достаточно информативен.
Генотипирование ВПЧ цены имеет более высокие, и такие затраты не всегда нужны.
В любом случае в результате проведения теста будет определен тип или нет, врач узнает, присутствует ли в организме папилломавирус ВКР.
Если он есть, и если присутствует в большой концентрации, в любом случае пациенту необходимо:
И это нужно, вне зависимости от конкретной разновидности обнаруженного вируса.
Где сдать анализы на типирование ВПЧ?
Сдавать анализы на ВПЧ нужно всем без исключения женщинам.
И не важно, есть ли у вас основания полагать, что вы заражены.
ВПЧ – вирус с огромной распространенности в популяции.
Это причина подавляющего большинства случаев цервикального рака.
А тот, в свою очередь, по распространенности у женщин в развивающихся странах уступает только раку груди.
Если вы хотите предотвратить цервикальный рак, приходите в нашу клинику и пройдите скрининг.
У нас проводятся все необходимые исследования:
Если анализы будут хорошими, вы приобретете эмоциональное спокойствие и уверенность в том, что опасная болезнь обойдет вас стороной.
Если же обнаружится ВПЧ высокого риска, то сможете вовремя пройти лечение и предотвратить цервикальный рак.
Для сдачи и интерпретации анализа на генотипирование ВПЧ обращайтесь к автору этой статьи – дерматовенерологу в Москве с многолетним опытом работы.
Днк генотипирование что это
Исследование, направленное на обнаружение генетического материала (ДНК) вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска с генотипированием 16 и 18 типов вируса. Выявляется 14 генотипов ВПЧ на основе метода полимеразной цепной в режиме реального времени с мультиплексной детекцией (Roche Cobas 4800).
Вирус папилломы человека высокого канцерогенного риска; ВПЧ высокого канцерогенного риска; ДНК [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени, Roche Cobas 4800].
Human Papillomavirus; HPV; high carcinogenic risk; DNA [polymerase chain reaction, real-time PCR, Roche Cobas 4800].
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок смешанный из цервикального канала и поверхности шейки матки.
Общая информация об исследовании
Вирус папилломы человека (ВПЧ или HPV) представляет собой семейство ДНКсодержащих вирусов, являющихся причиной различных поражений кожи и слизистых оболочек человека. Известно более 100 типов ВПЧ, которые могут быть ассоциированы с появлением бородавок, папиллом, остроконечных и плоских кондилом, предраковых изменений (дисплазий) и рака шейки матки, влагалища, вульвы, рака прямой кишки, полового члена и новообразований некоторых других локализаций (например, орофарингеальной карциномы). Источником инфекции является больной человек или вирусоноситель. Основным путем передачи инфекции является половой путь. Возможно также заражение через бытовые предметы общего пользования и вертикальный путь передачи, от инфицированной женщины к ребенку во время беременности или родов.
Различают генотипы ВПЧ, инфицирование которыми приводит к развитию доброкачественных процессов, и тех, которые обладают высоким риском злокачественного перерождения. Генотипы ВПЧ 1, 2, 3, 4, 5, 10, 28, 49 относятся к неонкогенным; генотипы 6, 11, 13, 32, 34, 40, 41, 42, 43, 44 имеют низкий онкогенный риск; генотипы 26, 30, 53, 65 обладают средним онкогенным риском; генотипы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, относятся к ВПЧ высокого канцерогенного риска и 66, 68 относятся к типам вероятного риска для человека. В составе генома онкогенных типов ВПЧ имеются участки, ответственные за синтез определенных белков. Онкопротеины Е6 и Е7 подавляют процессы апоптоза (запрограммированной клеточной гибели) в клетках с измененным генетическим материалом. Они играют большую роль в развитии злокачественного опухолевого процесса. Участки генома L1 и L2 ответственны за синтез структурных белков капсидной оболочки вируса.
Инфицирование высокоонкогенными типами ВПЧ может быть ассоциировано с развитием цервикальной интраэпителиальной неоплазии (ЦИН/CIN) и рака шейки матки у женщин. Рак шейки матки занимает третье место в структуре заболеваемости женщин России злокачественными новообразованиями. В большинстве случаев, в 90 %, онкологический процесс представлен плоскоклеточной карциномой, реже – другими гистологическими вариантами (аденокарцинома и аденоплоскоклеточная карцинома). Длительная персистенция вируса и высокий уровень его содержания может быть ассоциирован с тяжестью заболевания.
К основному методу скрининга рака шейки матки и предраковых состояний относится цитологическое исследование по Папаниколау (мазок по Папаниколау). Согласно общепринятым рекомендациям, его проводят всем женщинам в возрасте от 21 года вне зависимости от возраста начала половой жизни с интервалом 3 года до достижения 65 лет. Для женщин в возрасте 30-65 лет может быть использована альтернативная скрининговая программа с интервалом 5 лет, предполагающая одновременное проведение двух анализов: цитологическое исследование по Папаниколау и ДНК-тестирование ВПЧ методом полимеразной цепной реакции. Следует отметить, что в молодом возрасте ВПЧ может спонтанно элиминироваться из организма и не детектироваться с помощью современных методов. При этом в 70 % случаев в течение первого года и в 90 % случаев через два года после инфицирования возможно самоизлечение.
Использование комбинированной диагностики (цитологического исследования и ДНК-тестирования) повышает эффективность обнаружения предраковых состояний, ЦИН 2 и 3 степени выраженности, рака шейки матки.
К современным методам диагностики относится метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (реал-тайм ПЦР). Полимеразная цепная реакция – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять генетический материал исследуемого возбудителя. Он характеризуется высокими показателями диагностической чувствительности и специфичности, быстротой получения конечного результата и доступностью. Особенностью метода является возможность выявлять ДНК (дезоксирибонуклеиновую кислоту) вируса даже при малом содержании её в исследуемом биологическом материале. Метод основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК.
Анализатор и тест-система Roche Cobas 4800 сочетает в себе автоматизированную подготовку проб для исследования и обнаружение 14 генотипов ВПЧ на основе метода ПЦР в режиме реального времени с мультиплексной детекцией. Это позволяет генотипировать и определять наличие ВПЧ 16 и ВПЧ 18 типов, а также пул из 12 типов ВПЧ высокого канцерогенного риска (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68). В качестве внутреннего контроля реакции используется β-глобин человека. Использование метода реал-тайм ПЦР Roche Cobas 4800 для скринингового определения генотипов ВПЧ высокого канцерогенного риска является рекомендованным, апробированным и клинически проверенным. Применение данного диагностического метода позволяет одновременно генотипировать вирус на ВПЧ 16 и ВПЧ 18. Данные типы вируса относятся к наиболее канцерогенным и ассоциированным с клинически значимым риском развития ЦИН 3 степени или рака шейки матки. Генотип ВПЧ 16 чаще встречается при плоскоклеточной карциноме, а ВПЧ 18 при аденокарциноме. Таким образом, возможно выявление генотипов ВПЧ высокого канцерогенного риска, прогнозирование риска развития инфекции, ЦИН и рака шейки матки, а также определение тактики, контроля проводимой терапии и оценки возможности развития рецидива после лечения.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?