днк человека hmbs что это у мужчин
Днк человека hmbs что это у мужчин
Исследование используется для диагностики папиллома-вирусной инфекции, с одновременным определением количества вирусной ДНК в исследуемом материале. Анализ позволяет сделать вывод о степени поражения слизистой, оценить эффективность терапии в процессе лечения. Определяется суммарное количество ДНК 14 типов ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР) с отдельным определением ДНК ВПЧ 16-го, 18-го и 45-го генотипов. Тест также позволяет оценить вероятность интеграции ВПЧ 16-го, 18-го и 45-го типа в геном человека (что является опасным и прогностически неблагоприятным фактором).
Папиллома-вирусы высокого канцерогенного риска, вирусы папилломы высокого канцерогенного риска, ВПЧ высокого канцерогенного риска.
Human Papillomavirus, DNA; HPV, Viral Load.
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Вирусы папилломы человека (ВПЧ) представляют собой широко распространённую и вариабельную группу вирусов, поражающих эпителий кожи и слизистых оболочек и обладающих онкогенным потенциалом. ВПЧ передаётся при тесном контакте с инфицированным эпителием, поэтому основные пути заражения – половой и контактно-бытовой. Возможна передача ВПЧ от инфицированной матери к плоду.
К факторам, провоцирующим развитие ВПЧ-инфекции, относятся ранее начало половой жизни, большое количество половых партнеров, сниженный иммунитет, применение оральных контрацептивов, авитаминозы, инфекции, передаваемые половым путём, курение и проживание в крупных городах.
Инкубационный период может длиться от 2 месяцев до 2-10 лет. Характерно скрытое течение заболевания, при котором отсутствуют клинические проявления, а при кольпоскопическом, цитологическом и гистологическом обследовании выявляется норма. В 30 % случаев в течение 6-12 месяцев может произойти избавление от вируса. Диагностика скрытой ВПЧ-инфекции осуществляется только методом ПЦР.
ВПЧ может по-разному воздействовать на эпителий: способствовать возникновению доброкачественных образований (папиллом, кондилом) или объединению ДНК папиллома-вируса с геном клетки, что приводит к дисплазии (неоплазии) и в дальнейшем к раку (чаще всего в переходной зоне шейки матки).
К папиллома-вирусам высокого онкогенного риска относятся ВПЧ типов 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.
Для выявления возбудителя используется метод полимеразной цепной реакции, которая позволяет обнаружить ДНК вируса. Принцип метода основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять генетический материал возбудителя на ранних этапах заболевания. Он характеризуется высокими показателями диагностической чувствительности и специфичности, быстротой получения конечного результата и доступностью. Особенностью метода является возможность выявлять ДНК вируса даже при малом содержании её в исследуемом биологическом материале. Метод основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК. Для диагностики может использоваться разнообразный биологический материал, взятый у детей, взрослых лиц, людей с патологией иммунной системы, беременных женщин. Метод позволяет определять количество молекул ДНК исследуемого вируса, что является важным в диагностике острой формы инфекции, реактивации персистентной инфекции, носительстве вируса, а также при контроле эффективности проводимой противовирусной терапии.
По данным исследований, количественное содержание вируса в материале коррелирует со степенью неоплазии: чем выше вирусная нагрузка, тем выраженнее цитологические изменения в эпителии. При обследовании необходимо учитывать генотип вируса, наличие и степень цитологических и гистологических изменений в тканях, увеличение или снижение вирусной нагрузки через несколько месяцев (6 месяцев и более) после предыдущего обследования.
В исследовании проводится определение суммарного количества ДНК 14 типов ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР) с отдельным определением ДНК ВПЧ 16, 18 и 45 генотипов. ВПЧ ВКР являются главной этиологической причиной развития РШМ и предшествующей ему тяжелой дисплазии. ВПЧ обнаруживается в 95 % случаев РШМ, из них 16, 18, 45 генотипы в совокупности являются причиной 75 % плоскоклеточных раков и 94 % аденокарцином шейки матки.
Известно, что развитие РШМ часто ассоциировано с интеграцией ДНК вируса в геном клетки-хозяина. Наиболее часто интегрируют ВПЧ 16 и 18 генотипов, при этом происходит разрыв участка Е1/Е2 при сохранении онкогена Е6/Е7. В тест-системе, на которой выполняется данное исследование, по разным каналам прибора детектируются разные участки генома ВПЧ 16, 18 и 45 типов. Выявление области Е6 при отсутствии области Е1/Е2 позволяет косвенно судить о возможности интеграции вируса в геном человека. В случае обнаружения возможности интеграции вируса в геном в бланк ответа выводится соответствующая информация.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Уровень вирусной нагрузки интерпретируется с учетом результатов цитологического исследования мазков, гистологических изменений в биоптате и генотипа вируса, изменении его количества с течением времени.
Кто назначает исследование?
Папилломавирусная инфекция в гинекологии.
Проанализировав частые вопросы наших пациентов и актуальность проблемы роста заболеваемости ВПЧ ассоциированных заболеваний, предлагаем Вам, дорогие посетители нашего сайта, информацию о папилломавирусной инфекции (ПВИ).
ПАПИЛЛОМАВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ — БИЧ ХХI века.
Вирус папилломы человека (ВПЧ) не является нормальным представителем биотопа влагалища и относится к патогенным микроорганизмам. Установлено, что существует более 150 типов папилломавирусов, и около 40 типов могут инфицировать слизистую половых органов. На сегодняшний день заболевание вирусом папилломы — одна из самых распространенных проблем, как в гинекологии, так и в урологии.
Каждый тип ВПЧ воздействует на свою ткань, т.е. обладает типом и тканеспецифичностью. Именно от типа вируса зависит течение и симптомы заболевания.
Вирус папилломы человека провоцирует ряд гинекологических заболеваний: урогенитальные кондиломы, хронические цервициты, дисплазии вульвы, влагалища, шейки матки. К тому же, папилломавирусы могут вызвать рак шейки матки, рак вульвы и влагалища. Однако не всегда наличие вируса папилломы ведет к развитию этих опасных заболеваний, огромную роль играет общее состояние защитных механизмов организма, наличие различного рода гинекологических и соматических заболеваний, уровень вирусной нагрузки и тип папилломавируса.
В большинстве случаев ВПЧ передается половым путем. При этом, использование презервативов снижает, но полностью не исключает угрозу заражения данной инфекцией.
При профилактических гинекологических осмотрах не проводится специфического анализа на ВПЧ в государственных органах здравоохранения.
Врач может заподозрить наличие ВПЧ-инфекции по результатам онкоцитологического исследования. Тогда для выявления вируса папилломы рекомендуется проводить специальное обследование методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). При данном исследовании определяется наличие папилломавирусов, устанавливается их тип.
Обследование на ВПЧ рекомендуется проходить всем женщинам, особенно при наличии эрозии шейки матки, цервицита, аногенитальных кондилом, папиллом, при изменении в онкоцитологическом мазке, при смене полового партнера, специфическом зуде наружных половых органов и исключении кандидоза и половых инфекций.
Нужно ли лечить партнера? Обследовать — да. При наличии ВПЧ лечение проводится совместно с половым партнером, несмотря на то, что для мужчин данная инфекция не представляет такого серьезного риска, как для женщин. Это уменьшает вероятность реинфекции, обуславливает успешность лечения.
Какие типы ВПЧ встречаются?
По данным масштабного скринингового исследования Lorincz I и соавт. установлены наиболее часто встречаемые типы ПВИ гениталий, которые распределены в группы низкого, среднего и высокого онкогенного риска:
-Низкого онкогенного риска: с 42 по 44, 6 и 11 типы;
-Среднего риска: 31 и 33, 51 и 35, 52 и 58 типы;
-Высокого риска: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 56, 58, 59, 68, 73, 82 типы.
Период инкубации
Инкубационный период папилломовирусной инфекции может варьироваться от нескольких недель до нескольких лет.
ВПЧ может иметь латентный характер, т. е. протекать без видимых симптомов.
Большой процент заразившихся, особенно молодых женщин (от 60 до 90%), склонны к самоизлечению за 6-12 месяцев. У других заболевание может переходить в хроническую форму с вероятным развитием злокачественных процессов.
За всю свою жизнь человек инфицируется несколькими типами ВПЧ. Определенные факторы пробуждают активность ВПЧ, и тогда болезнь переходит в фазу клинических проявлений.
Период клинических проявлений: по ряду причин после латентного периода в геноме ДНК выполняется реализация закодированной информации, и клетки эпителия начинают делиться. В этот период пациентки могут предъявлять жалобы на усиление белей, зуд, визуализацию клинических признаков заболевания, например, появление кондилом и папиллом. Появляются и констатируются врачом гинекологом кольпоскопические и / или вульвоскопические признаки заболеваний. В помощь врачу является цитология из шейки матки и ПЦР исследования на ВПЧ и сопутствующие половые инфекции.
Пути заражения и передачи папилломавирусной инфекции
Наиболее возможным путем передачи ВПЧ является прямой контакт кожных покровов или слизистых оболочек. Вероятность заражения вирусом напрямую обусловлена количеством половых партнеров: при одном партнере у женщин возбудитель обнаруживается в 17-21% случаев, при 5 партнерах — в 70-80% случаев.
— Традиционный половой контакт — основной путь инфицирования, а папилломавирусная инфекция является инфекцией, передаваемой половым путем.
— Нетрадиционный половой контакт: заражение партнеров возможно также при нетрадиционных контактах (гомосексуальный, аногенитальный, оральный).
-Возможен контактный путь передачи (прикосновениях, генитальные ласки).
-Контактно — бытовой путь: через предметы личного пользования (полотенца, мочалки), в общественных местах (бани, бассейны, душевые).
-Вертикальный путь — возможно заражение во время родов через естественные родовые пути от матери ребенку (при наличии кондилломатоза половых путей у роженицы и активности вируса папилломы человека). В таких ситуациях у детей возможно развитие вестибулярного папилломатоза гортани. Согласно статистических данных риск заражения ребенка составляет менее 3%.
-Имеются случаи инфицирования врачей, медицинского персонала, производящего лазерное и радиоволновое лечение у больных с ВПЧ, с последующим развитием у них папилломатоза конъюнктивы и гортани.
По результатам IARC (2014 г.), в 98% случаев заболеваний рака шейки матки в мире обнаруживаются всего 13 типов ВПЧ. Наиболее опасными (67-93% случаев рака) являются вирусы типов 16 и 18.
Появление остроконечных кондилом и папиллом на слизистой ротоглотки, слизистой шейки матки, прямой кишки вызвано папилломовирусами 6 и 11, 16 и 13, 18, 33 и 31 типов, а также 35 типом.
Факторы риска заражения и развития заболевания
— ранняя половая активность;
— многочисленные половые партнеры;
— наличие сопутствующих скрытых половых инфекций;
— хронические воспалительные процессы органов малого таза;
— частые аборты, травматизация шейки матки;
— нарушение микробиоценоза влагалища;
Контингент женщин для обследования на ВПЧ
— женщины с большим количеством (более 5) половых партнеров и рано начавшие сексуальную активность;
— женщины с жалобами на бели, зуд в интимной зоне;
— женщины с любого рода образованиями шейки матки;
— женщины с кондиломами и папилломами на наружных половых органах;
— женщины, имеющие факторы риска ПВИ;
— женщины, имеющие половых партнеров с ВПЧ.
Формы заболевания
Разные формы вируса вызывают следующие клинические формы:
-генитальные кондиломы; 
-Дисплазия шейки матки, вульварная, цервикальная, влагалищная дисплазия;
-рак шейки матки; 
-опухоли влагалища и перианальной области (карцинома, вызванная 45 типом); 
-образование остроконечных кондилом на коже и слизистых половых органов и мочевыводящих путей. 
Диагностика
Диагностика заболевания, прежде всего, базируется на жалобах больного и выявленной патологии. При наличие подозрений на патологию шейки матки исключаются половые инфекции, выполняется вульво- и кольпоскопия шейки матки. Выполняется цитологическое исследование слизистой экто- и эндоцервикса шейки матки, бактериоскопическое исследование биологического материала.
При обнаружении дисплазии шейки матки спектр диагностических исследований расширяется. Требуются биопсия шейки матки, кюретаж цервикального канала и ряд дополнительных исследований, регламентирующихся протоколами Министерства здравоохранения.
Нужно обратить внимание на то, что все женщины с подозрением на ПВИ, как и мужчины, обязательно должны пройти обследование на сифилис, СПИД, гепатит В и С. В сомнительных случаях обследование крови на сифилис необходимо повторить.
Современный взгляд на проблему лечения ВПЧ
Папилломавирусная инфекция (ПВИ) так часто встречается и последствия ее настолько значительны, что, принимая во внимание расходы на её диагностику и лечения всех возможных патологий, например, в США ее относят к самой дорогостоящей инфекции после СПИДа. Стоимость капиталовложений на проведение исследований и лечение ВПЧ составляет в районе 1,6-6 млрд. долларов в год.
На сегодняшний день специфических препаратов для лечения папилломавирусной инфеккции не создано. Процессы создания и внедрения вакцин еще не завершились полным успехом. Открытие роли ВПЧ также привело в какой-то мере к всплеску гиперлечения. Однако развитие новых технологий позволяет сегодня подобрать уже более грамотную индивидуальную и щадящую методику лечения для каждой конкретной пациентки.
Вероятность самопроизвольного «очищения» от ВПЧ-носительства и возможность самостоятельного излечения склоняет ряд исследователей к наблюдению, особенно у подростков. Но в каждом конкретном случае патологии своя тактика.
Лечение папилломавирусной инфекции у женщин
Существует мнение, что ВПЧ инфекцию излечить нельзя и, соответственно, нет смысла проводить терапию. Это заблуждение. Полностью устранить из организма вирус мы можем на этапе вирусоносительства (до внедрения ВПЧ в клетки). Но даже если существует интегрированная форма ВПЧ (ВПЧ успел внедриться в клетки) лечение должно проводиться, так как это снизит вирусную нагрузку, уменьшит риск развития дисплазии и онкологических заболеваний шейки матки.
Современные возможности лечения папилломавирусной инфекции у женщин включают:
-деструкцию экзофитных образований (кондилом) и атипически измененного эпителия (эрозия, дисплазия шейки матки);
-цитотоксические препараты ( подофиллотоксин, блеомицин,5-фторурацил);
-иммунокорригирующие средства (интерфероны, синтетические иммуномодуляторы, иммуноглобулины и т.д.);
— фотодинамическую терапию (На поверхность патологических образований вносят фотосенсибилизирующее вещество. Под действием определенного спектра света в пораженной ткани происходит трансформация этого спектра и последующий выброс активных форм кислорода, которые разрушают нездоровые клетки);
— профилактическую вакцинацию до вступления в половую жизнь;
— неспецифические средства (антиоксиданты, индолы).
С помощью деструктивных методов можно избавиться от очага поражения.
Локальное лечение деструктивными методами включает в себя электролечение, криолечение, лазеротерапию, химиокоагуляцию и радиоволновое лечение.
В медицинском центре Гармония врачи гинекологи кроме медикаментозного лечения ВПЧ, используют радиоволновую терапию для лечения патологии шейки матки, в том числе и вирусной этиологии.
В настоящее время данный метод признан наиболее передовым. Выполняется лечение шейки матки безболезненно и бескровно. Радиоволновой метод терапии не оставляет стриктур и ожогов на шейке матки и слизистой половых губ при наличии кондилом. Радиоволновой метод терапии может быть рекомендован, в том числе нерожавшим женщинам, при наличии показаний. РВТ процедуры выполняются с помощью американского аппарата Сургитрон. 
В заключение хотелось бы отметить, что чем раньше обнаруживается заболевание, тем более эффективны будут любые лечебные мероприятия.
Дорогие женщины берегите свое здоровье, будьте внимательны к себе!
Папилломавирусная инфекция у мужчин
За последние годы проблема заболевания раком половых органов и анальной области мужчин стала крайне актуальной. Связь с ВПЧ вышеупомянутых недугов научно доказана.
Вирус папилломы человека у мужчин определяется в 40-60% случаев, если их половыми партнерами являются женщины с ВПЧ. При этом выявляются те же штаммы вируса, что и у инфицированных пациенток или половых гомосексуальных партнеров, а в 75% на коже и слизистых проявляются характерные признаки инфекции. Болезнь провоцирует снижение иммунного статуса практически во всех случаях.
Необходимо отметить, что необследованный половой партнер – фактор риска возобновления заболевания или реинфекции.
Контингент мужчин для обследования на ВПЧ
— сексуально активные мужчины с большим количеством (более 5) половых партнерш или половых партнеров у гомосексуальных пар и рано начавшие половую жизнь;
— мужчины с жалобами на выделения из полового органа, анального канала, зуд;
— мужчины с любыми образованиями на половом члене и прямой кишке;
— мужчины с кондиломами и папилломами ;
— мужчины, имеющие факторы риска ПВИ;
— мужчины, имеющие инфицированных половых партнеров или партнерш.
В медицинском центре Гармония обследование на половые инфекции и ВПЧ можно выполнить без направления врача, без предварительной записи в кабинете № 1 в Жодино и кабинете № 4 в Борисове с 8.30-19.00.
Перед исследованием не мочиться 2-3 часа, не использовать антибактериальные средства 1 мес.
Время забора крови 8.30-12.30 в процедурном кабинете № 1 в Жодино и процедурном кабинете № 4 в Борисове.
Дополнительную информацию можно получить по нашим контактным телефонам у администраторов медицинского центра.
Молекулярно-биологические методы диагностики ВПЧ-инфекции
Молекулярно-биологические методы предоставляют информацию о развитии ВПЧ-инфекции, но не позволяют судить о наличии заболевания, поскольку факт инфицирования ВПЧ не всегда сопряжен с заболеванием. Два основных метода диагностики ДНК ВПЧ — полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени и метод гибридного захвата (Digine-тест). Оба метода практически не отличаются по чувствительности и специфичности, однако, сертифицирован и одобрен FDA только Digene-тест.
Технология Digene-теста основана на гибридном захвате и заключается в уникальном способе связывания вирусной ДНК с РНК-зондом, захвате полученного гибрида моноклональными антителами и хемилюминисцентной детекции образуемых комплексов.
По сути это качественный тест, который применяется для профилактического скрининга для ранней диагностики патологии шейки матки. Тест идентифицует 13 генотипов высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и 5 генотипов низкого риска (6, 11, 42, 43, 44).
Тест одобрен Федеральной службой РФ по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (ФСНСЗСР). Digene-тест выявляет клинически значимый уровень инфицирования вирусом папилломы человека, который приводит к развитию неоплазии шейки матки. Положительный результат теста выдается в единицах Digine. Отрицательный тест практически исключает CIN II и CIN III.
Обнаружение ДНК ВПЧ в качественном формате
ДНК ВПЧ длительно сохраняется в образцах тканей, поэтому ее легко можно идентифицировать. Для определения достаточно минимального количества исследуемого образца. «Качественное» определение ДНК ВПЧ имеет спорную клиническую значимость, поскольку указывает только на факт наличия вируса, не позволяя сделать прогноз относительно течения инфекции. В большинстве случаев инфекция элиминируется самостоятельно.
Количественное определение вируса ВПЧ
Количественный анализ ДНК ВПЧ наиболее чувствителен на ранних этапах папилломавирусной инфекции, когда отсутствуют другие признаки инфицирования. Например, цитологические, клинические. Метод количественного определения используется в качестве скрининга, особенно в рамках национальных программ контроля рака шейки матки, а также для оценки эффективности терапии.
Количественные ПЦР-методы направлены на максимальную чувствительность выявления вирусной ДНК, однако, не всегда существуют прямые клинические корреляции.
Одним из критериев клинически значимой инфекции, которая с высокой степенью вероятности способна развиться в неоплазию, рассматривается вирусная нагрузка. Вирусная нагрузка 3 lg на 105 клеток является клинически малозначимой, поскольку сопровождается минимальным риском дисплазии и почти в 100% случаев заканчивается спонтанной регрессией. Вирусная нагрузка больше 5 lg на 105 клеток считается повышенной и сопряжена с высоким риском развития дисплазии. Снижение вирусной нагрузки на 1 lg за 6 месяцев говорит о транзиторной инфекции.
Прогностическая ценность вирусной нагрузки на сегодняшний день однозначно не определена.
Генотипирование вируса методом ПЦР позволяет определить тип вируса ВПЧ и его онкогенность. Этот метод подходит для выявления персистенции ВПЧ и позволяет отличить случаи реинфекции. О реинфицировании говорит изменение спектра генотипов, о персистентной инфекции — сохранение генотипа вируса через год после первого тестирования.
При инфицировании несколькими генотипами ВПЧ одновременно, прогноз течения заболевания менее благоприятный, а риск персистенции и риск развития РШМ по сравнению с инфицированием одним типом более высокий.
Выявление ВПЧ высокого риска свидетельствует о наличие папилломавирусной инфекции. ВПЧ высококанцерогенного риска имеют различный онкогенный потенциал. На долю самых опасных, 16 и 18, приходится около 70% всех случаев цервикального рака. Генотипирование на ВПЧ 16 и 18 позволяет выделить группу женщин, которые имеют повышенный риск развития цервикального рака.
Рекомендации ВОЗ по профилактике рака шейки матки
Инфекция, вызываемая вирусом папилломы человека
ВПЧ – группа распространенных и генетически разнообразных вирусов, инфицирующих и поражающих эпителий кожных покровов (кожные типы ВПЧ) и слизистых оболочек ротовой полости и аногенитальной области (генитальные типы ВПЧ). Генитальные типы ВПЧ передаются преимущественно половым путем и через родовые пути от матери ребенку. Основными клиническими формами папилломавирусной инфекции гениталий являются остроконечные кондиломы, а также злокачественные формы изменения эпителиальных клеток, приводящие к раку шейки матки.
Исход инфекции зависит от типа вируса. Типы ВПЧ низкого канцерогенного риска (НКР, низкоонкогенные) связаны с остроконечными кондиломами и дисплазиями легкой степени. Типы ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР, высокоонкогенные) – 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 – наряду с остроконечными кондиломами и дисплазиями легкой степени, также индуцируют злокачественную трансформацию эпителия, приводящую к инвазивному раку.
Дифференциальная диагностика. Поражения шейки матки, влагалища, вульвы, пениса, заднего прохода непапилломавирусной этиологии; в случае остроконечных кондилом – с проявлениями, связанными с вирусом простого герпеса, а также с истинными папилломами.
Лабораторная диагностика папилломавирусной инфекции включает выявление и количественное определение ДНК ВПЧ ВКР, генотипирование ВПЧ ВКР, выявление ДНК ВПЧ НКР.
Материал для исследования
Выявление и определение концентрации вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска
Показания к обследованию
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для выявления ДНК ВПЧ ВКР используют МАНК (ПЦР, NASBA, TMA и др.) и методы амплификации сигнала (гибридный захват). Культивировать вирус не удается.
Гибридный захват является первым и наиболее охарактеризованным методом выявления ДНК ВПЧ. Применение метода позволяет определять концентрацию вируса в условных единицах оптической плотности, линейный диапазон небольшой (3–4 порядка). Образцы, в которых присутствует вирус в концентрации ниже порога клинической значимости, учитываются как отрицательные. Граница клинической значимости определяется путем тестирования эталонного образца (концентрация ДНК ВПЧ 1 пг/мл). Все сигналы, значения которых ниже эталонного, считаются отрицательными. Более современными, быстрыми и удобными для использования являются методы на основе АНК. МАНК, работающие в неколичественном формате, выявляют либо ДНК вируса (ПЦР, HDA и др.), либо мРНК транскрипты онкогенов E6 и E7 ВПЧ (NASBA, TMA). Для выявления только клинически значимых концентраций (по разным методикам учета – более 1 пг/мл или 1000 копий ДНК вируса на 100000 клеток человека) используют методики с чувствительностью, при которой образцы с низкой концентрацией учитываются как отрицательные. Наиболее целесообразно использовать ПЦР в реальном времени, которая позволяет точно определить концентрацию ДНК вируса. На основе полученных данных проводится не только оценка концентрации вируса, но, что важно, проводится градация результата по клинической значимости полученной концентрации на:
Различные наборы реагентов могут отличаться спектром выявляемых генотипов. К группе ВПЧ ВКР относятся 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 генотипы. Наиболее канцерогенными считаются 16 и 18 типы, наименее – 51, 56, 68. Для РФ и стран СНГ клинический смысл исследования сохраняется только при определении как минимум 10 генотипов из перечисленных выше. Выявление в смеси генотипов низкого или неустановленного риска существенно снижает специфичность выделения группы риска онкологической патологии и не может быть оправдано.
Показания к применению различных лабораторных исследований. Для проведения скринингового обследования на наличие предрака и рака шейки матки предпочтительным является использование мазков/соскобов эпителия цервикального канала и зоны трансформации, выполненных цервикальными цитологическими щеточками. Допускается использование для этих целей мазков из влагалища. Для скрининга рака шейки матки все тесты, вне зависимости от выбранной технологии, должны иметь сбалансированные аналитические и диагностические характеристики, удовлетворяющие следующим условиям – не менее 98% чувствительность по отношению к CIN2+ и не менее 90% специфичность относительно широко валидированного в скрининге теста (например, Hybrid Capture II). Для достижения оптимума аналитической чувствительности избирают подход отсечения образцов с концентрацией ДНК ВПЧ ниже порога клинической значимости. Для этого либо проводят искусственное снижение аналитической чувствительности, либо выбирают в качестве референтного контрольный образец с требуемой пороговой концентрацией. Предпочтительным является измерение концентрации ДНК ВПЧ методом ПЦР в реальном времени.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Обнаружение ДНК ВПЧ в любой концентрации свидетельствует о наличии возбудителя, однако при интерпретации результатов тестирования следует учитывать, что более 80% инфицированных спонтанно излечиваются в течение 12–24 мес. Опасность представляет персистентная форма инфекции (сохраняющаяся более 12–24 мес.). Однократный положительный результат надежно указывает на принадлежность к группе риска развития рака шейки матки в случае, если исследование проводится в группе женщин старше 30 лет или вступивших в половую жизнь более 6–7 лет назад. Особая настороженность должна быть проявлена в отношении пациенток, у которых подтверждается персистенция вируса при повторном тестировании через 1 год. При скрининге с использованием количественных тестов принимают во внимание только клинически значимый результат. Для дифференциальной диагностики и наблюдения пациентов после проведения лечения дополнительная ценность одиночного количественного определения не показана. Перспективным в прогнозе риска рецидива CIN2+ является оценка динамики вирусной нагрузки после лечения (снижение или увеличение концентрации вируса).
Генотипирование вирусов папилломы человека. Цель генотипирования ВПЧ – отличие персистирующей инфекции от случая повторного инфицирования (сохранение генотипа в повторных тестах); уточнение тактики ведения больных в зависимости от онкогенности выявленных типов вируса.
Показания к обследованию. Пациенты с выявленной папилломавирусной инфекцией ВКР
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для генотипирования ВПЧ используют МАНК. Распространение получили методики с детекцией продуктов амплификации методом электрофореза (генотипирование по величине амплифицируемого фрагмента), гибридизации на плашках и стрип-полосках, ПЦР в реальном времени.
Классические методики, использующие принцип гибридизации со специфическими зондами позволяют определять наиболее широкий спектр генотипов (20–40). Однако использование для амплификации универсальных праймеров приводит к существенным различиям в аналитической чувствительности выявления различных генотипов ВПЧ, приводя к заметным искажениям результатов. Кроме того, широкий спектр определяемых генотипов необходим только для научных исследований. В клинической практике достаточным может считаться генотипирование ВПЧ ВКР (10–13 типов). Методики, основанные на применении типоспецифических олигонуклеотидов, позволяют проводить типирование спектра клинически значимых генотипов и в заметной степени лишены проблемы различий аналитической чувствительности по отношению к разным генотипам ВПЧ. Предпочтение должно отдаваться мультиплекс-методикам с использованием ПЦР в реальном времени как наиболее быстрым, контаминационно безопасным, предполагающим возможность автоматизации. Может проводиться сокращенное генотипирование с выявлением только наиболее онкогенных типов ВПЧ 16 и 18.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Для установления персистенции вируса применяют подход повторного генотипирования через 12 месяцев. Персистенция подтверждается при сохранении генотипа/ генотипов при повторном исследовании, полная смена спектра генотипов указывает на излечение и повторное инфицирование альтернативными ВПЧ. Выявление наиболее онкогенных типов ВПЧ (16 и 18) может указывать на потребность в более агрессивной тактике ведения больных (более частые повторные визиты, более тщательное обследование для выявления предраковых изменений и др.).
Выявление вирусов папилломы человека низкого канцерогенного риска
Показания к обследованию
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для выявления ДНК ВПЧ НКР используют МАНК (ПЦР, NASBA, TMA и др.) и методы амплификации сигнала (гибридный захват). Предпочтение должно отдаваться быстрым и контаминационно-безопасным методикам, таким как ПЦР в реальном времени.
Клинически оправданным является определение двух генотипов 6 и 11 (более 90% случаев папилломатоза гортани у детей). Некоторую дополнительную ценность имеет выявление 42, 43 и 44 генотипов. Количественное определение не оправдано.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Выявление 6 и/или 11 генотипов указывает на возможный риск развития папилломатоза гортани у ребенка (риск повышается, если вирус обнаружен в гортани). При планировании беременности может быть рекомендована выжидательная тактика. При сопутствующем наличии остроконечных кондилом – их лечение методом химической и/или физической деструкции. При наличии беременности ее прерывание или родоразрешение методом кесарева сечения не оправданы, так как риск развития папилломатоза гортани ниже риска возможных осложнений указанных операций.